Rozszczepianie i inaktywacja czynnika IX przez elastazę granulocytową.

Radioaktywowany radioaktywnie czynnik IX został rozszczepiony przez surowy sonik z leukocytów. W przypadku braku wapnia fragmenty o masie cząsteczkowej mniejszej niż 15 000 mol. Obserwowano w próbkach zredukowanych na elektroforezie żelowej. Po trawieniu w 2 mM wapnie, jednak elektroforeza zredukowanych próbek wykazała, oprócz fragmentów o niskiej masie cząsteczkowej, prążki białek odpowiadające wielkości ciężkim i lekkim łańcuchom czynnika IX aktywowanego przez czynnik XIa. Aktywność rozszczepiania w sonikatach leukocytów była hamowana przez inhibitor trypsyny sojowej, ale tylko w niewielkim stopniu przez aprotyninę. Elastaza granulocytarna została wyizolowana z oczyszczonych ziarnistości polimorfojądrowych leukocytów za pomocą chromatografii powinowactwa na agarze sojowym z inhibitorem trypsyny i dalszej chromatografii na karboksymetylocelulozie. Oczyszczona frakcja zawierała dwa izozymy na kwaśnych żelach, które rozszczepiały zarówno wrażliwy na ester do elastazy, jak i znakowany radioaktywnie czynnik IX. Te dwie aktywności były hamowane przez specyficzny dla elastazy keton chlorometylowy. Wyizolowana frakcja proteazowa szybko dezaktywowała pozorną aktywność czynnika IX w układzie testu koagulantu. Stopień inaktywacji był skorelowany z ilością nienaruszonego, znakowanego radioaktywnie czynnika IX rozszczepionego. Podobnie jak w przypadku surowego sonikatu, wytwarzanie większych fragmentów o dużym łańcuchu ciężkim i lekkim zależało od wapnia. Aby bezpośrednio ocenić wpływ elastazy na czynnik IX, opracowano immunospecyficzny, ukierunkowany miejscowo test. W tym teście próbkę inkubowano z przeciwciałem w fazie stałej wobec czynnika IX i wykryto ilość aktywowanego produktu, który był skompleksowany z radioaktywowaną jodem antytrombiną III. W tym układzie ekspozycja czynnika IX na czynnik Xla wykazała postępujący wzrost zdolności wiązania antytrombiny III, podczas gdy po elastazie czynnik XIa nie był w stanie wytworzyć wiązania antytrombiny III. Czynnik IX ulegający degradacji elastazy nie hamował aktywacji dodatkowego czynnika IX w testach krzepnięcia. Gdy czynnik IXa był inkubowany z elastazą, wiązanie antytrombiny III było zmniejszone, co odpowiada pojawianiu się fragmentów o niskiej masie cząsteczkowej na równoległych próbkach, które zostały zredukowane i poddane elektroforezie. Dane te są zgodne z dezaktywującym elastazę czynnikiem IX przez rozszczepienie wiązań w pobliżu, ale różnych od, wiązań rozszczepionych przez czynnik XIa.
[patrz też: babka plesznik, badanie mykologiczne, babka płesznik opinie ]